Spectroscopie UV-visible, IR, chromatographie, titrages, loi de Beer-Lambert.
Beer-Lambert
HPLC
Titrage
Spectrophotométrie
Spectrophotométrie UV-visible
Loi de Beer-Lambert
A = ε × l × c. A = absorbance (grandeur sans unité, mesurée par le spectrophotomètre). ε = coefficient d'extinction molaire (L·mol⁻¹·cm⁻¹, caractéristique du composé à λ fixée). l = longueur du trajet optique (cm, dépend de la cuve). c = concentration en mol/L. La loi n'est valable qu'à faible concentration et à longueur d'onde fixée (λ_max). Elle permet de déterminer une concentration inconnue par comparaison à une droite étalon (A = f(c)).
Spectre UV-visible et λ_max
Chaque molécule (chromophore) absorbe à des longueurs d'onde caractéristiques dans l'UV (200–400 nm) ou le visible (400–800 nm). λ_max est la longueur d'onde d'absorbance maximale — on travaille à cette valeur pour maximiser la sensibilité de la mesure et la validité de Beer-Lambert. La couleur observée est la complémentaire de la couleur absorbée (un composé absorbant dans le rouge paraît vert).
Chromatographie
Principe général
Séparation de composés d'un mélange par distribution différentielle entre deux phases : stationnaire (immobile — colonne, plaque) et mobile (solvant, gaz — qui entraîne les composés). Les composés qui interagissent fortement avec la phase stationnaire migrent lentement ; ceux qui ont plus d'affinité pour la phase mobile migrent vite. Résultat : séparation spatiale ou temporelle des composants.
HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
Chromatographie liquide à haute pression : la phase mobile (solvant) est poussée sous pression (100–400 bar) à travers une colonne de phase stationnaire très finement grainée. Chaque composé est caractérisé par son temps de rétention t_R. Détection UV, fluorescence ou réfractométrie. Applications : dosage de médicaments, contrôle qualité alimentaire, analyse d'eau. La CPG (Chromatographie en Phase Gazeuse) est utilisée pour les composés volatils.
Titrages et spectroscopie IR
Titrage acide-base
Réaction de neutralisation : AH + OH⁻ → A⁻ + H₂O. À l'équivalence : n(acide) = n(base) introducits → c_acide × V_acide = c_base × V_équivalence. Détection du point d'équivalence : indicateur coloré (changement de couleur) ou pH-métrie (saut de pH vertical sur la courbe pH = f(V versé)). Le titrage permet de déterminer la concentration inconnue d'une solution à partir d'une solution de concentration connue (solution titrante).
Spectroscopie infrarouge (IR)
Chaque liaison chimique vibre à une fréquence propre et absorbe le rayonnement IR correspondant (exprimé en nombre d'onde, cm⁻¹). Zones clés à connaître : 3500–3200 cm⁻¹ (O-H alcool, élargissement), 3300 cm⁻¹ (N-H amine), 2700–2900 cm⁻¹ (C-H aldéhyde), 1700–1750 cm⁻¹ (C=O carbonyle : acide, ester, cétone), 1600 cm⁻¹ (C=C). La zone 500–1500 cm⁻¹ est l'empreinte digitale, unique à chaque molécule.